Исследование спермы (спермограмма)
Спермограмма – метод исследования спермы (эякулята) для оценки оплодотворяющей способности (фертильности) мужской спермы.
NB! Оценивать «качество» спермы и ее способности к оплодотворению по отдельно взятым параметрам некорректно, необходимо учитывать одновременно все показатели. Рекомендованные ВОЗ показатели нормы для фертильной спермы не являются минимально необходимыми для зачатия, т. е. мужчина с даже более низкими показателями вполне способен к оплодотворению партнерши.
NB! В случае уточнения диагноза мужского бесплодия при получении результатов спермограммы, отличных от нормы, необходимо через 1–2 недели пересдать анализ и уже на основании вновь полученных результатов искать причины возникшего неблагополучия.
Правила сбора материала
1. Анализ спермы сдается после не менее чем 48-часового и не более 7-дневного полового воздержания (оптимально – 4 дня). Необходимо добавить – от всех видов сексуальной активности!
2. В период воздержания при подготовке к анализу нельзя принимать алкоголь, лекарственные препараты, посещать баню или сауну, подвергаться воздействию УВЧ и интенсивных магнитных полей. При повторном исследовании желательно выдерживать одинаковые периоды воздержания для снижения колебаний полученного результата.
3. Эякулят получают путем мастурбации. Собирают в специальный стерильный контейнер, который обычно выдается в лаборатории. На контейнере необходимо указать фамилию, дату и точное время получения эякулята.
4. Использовать презерватив для сбора спермы запрещено: латекс и вещества, используемые для смазки презервативов, могут влиять на степень подвижности сперматозоидов и другие их характеристики.
5. Во время транспортировки в лабораторию сперму сохранять при температуре от 20 до 40 °C, но лучше сбор материала осуществить непосредственно в лаборатории (большинство специализированных лабораторий предоставляют условия для этого).
6. Если мастурбация была успешной, но эякулят не получен, необходимо сразу помочиться и доставить на анализ всю полученную мочу.
Показания к назначению анализа:
• бесплодный брак (выявление мужского фактора);
• бесплодие у мужчин (простатит, варикоцеле, инфекции, травмы, гормональные нарушения);
• подготовка к использованию вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО, ИКСИ[14]).
Спермограмма включает: физические параметры (объем, цвет, рН, вязкость, скорость разжижения), количественные характеристики (количество сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте, подвижность), а также их морфологию (содержание нормальных форм, с патологией), наличие агглютинации и клеток сперматогенеза и другие показатели.
Интерпретация результатов[15]
• Азооспермия – в эякуляте отсутствуют сперматозоиды, однако присутствуют клетки сперматогенеза и секрет простаты.
• Аспермия – отсутствие в эякуляте сперматозоидов и клеток сперматогенеза.
• Астенозооспермия – снижение подвижности сперматозоидов (количество подвижных форм менее 25 %, количество малоподвижных и подвижных форм – менее 50 %).
• Гемоспермия – наличие эритроцитов в сперме.
• Лейкоцитоспермия – число лейкоцитов в эякуляте превышает 1 млн/мл.
• Нормоспермия – нормальная сперма.
• Олигозооспермия – снижение количества сперматозоидов в эякуляте – менее 20 млн в 1 мл.
• Олигоспермия – снижение объема эякулята – менее 2 мл.
• Пиоспермия – наличие гноя в сперме.
• Полиспермия – повышенное количество сперматозоидов в эякуляте или его большой объем (более 8–10 мл).
• Тератозооспермия (тератоспермия) – наличие в эякуляте более 50 % аномальных форм спермиев.
Характеристика движения сперматозоидов (по классификации ВОЗ, 1992 г.)
A – быстрое прогрессивное движение;
B – медленное линейное и нелинейное прогрессивное движение;
C – колебательное или движение на месте;
D – сперматозоиды неподвижны.
Характеристика движения сперматозоидов (по классификации Американской урологической ассоциации (AUA), 1997 г.)
0– отсутствие движения;
1 – вялое движение на месте;
2 – медленное извилистое движение;
3 – умеренное прогрессивное движение;
4 – выраженное прогрессивное движение.
Причины патологических изменений в спермограмме:
• варикоцеле;
• вредное воздействие соединений свинца, ртути, рентгеновского и другого излучения;
• генетические (врожденные) заболевания;
• гормональные нарушения (необходимо определять уровень ФСГ, ЛГ, тестостерона, пролактина – см. раздел 5. «Исследование гормонов»);
• нарушение проходимости семявыносящих протоков;
• токсическое воздействие (алкоголь, лекарственные средства, наркотики);
• хронические воспалительные заболевания половых органов.
Глава 6ДНК-диагностика: ПЦР-анализ
ДНК-диагностика – это один из наиболее современных высокотехнологичных методов исследования, который широко применяется в диагностике инфекционных заболеваний, позволяя обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме человека. В современной клинической практике ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самым распространенным из которых является метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэрри Мюллисом в 1983 г. Открытие полимеразной цепной реакции стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии в последней четверти XX века, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.
Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. Говоря «небольшой фрагмент ДНК», мы подразумеваем «обрывок» нуклеиновой цепочки длиной всего в несколько сотен пар нуклеотидов – тогда как любая, самая простая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований. Такой подход является наиболее эффективным при диагностике внутриклеточных паразитов и медленнорастущих микроорганизмов, требующих сложных условий культивирования для ранее использовавшихся способов диагностики.
Благодаря высокой точности определения появилась возможность поиска возбудителей болезней практически в любом биологическом материале. Сегодня методу ПЦР-анализа подвергаются:
• соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала);
• кровь, плазма, сыворотка крови;
• биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна);
• моча;
• мокрота;
• биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки;
• слизь и другие биологические выделения.
Достоинства метода
• Высокая специфичность за счет того, что искомые кусочки генетического материала имеют уникальные последовательности ДНК.
• Высокая чувствительность за счет многократного размножения исходного материала.
• Универсальность – при правильном подходе может быть проанализирован любой материал.
• Быстрое получение результата (в отличие от бактериологических методов, где результата приходится ждать довольно долго).
• Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).
• Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).
ПЦР-анализ может быть качественный и количественный – т. е. может просто свидетельствовать о наличии того или иного возбудителя, а может и давать информацию о количественном содержании возбудителя в тех или иных биологических материалах.
Как подготовиться к ПЦР-анализу
Достоверность результатов лабораторной диагностики ПЦР зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:
• за сутки до проведения анализа не жить половой жизнью;
• сдача ПЦР-анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку;
• для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в стерильный контейнер.
ПЦР-анализы
В устоявшейся клинической практике ПЦР-анализы обычно сдают «блоками[16]» на определенные группы возбудителей.
Например:
• ПЦР-диагностика инфекций, передаваемых половым путем, где одновременно выявляются:
– бактериальные инфекции: Chlamydia trachomatis (хламидия), Mycoplasma hominis (микоплазма человека), Gardnerella vaginalis (гарднерелла), Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная), Ureaplasma parvum (уреаплазма парвум), Ureaplasma urealyticum (уреаплазма уреалитикум), Neisseria gonorrhoeae (гонококки);
– вирусные инфекции: HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека) типы 16, 31, 33, 35Н, 52, 58, 67; типы 18, 45, 39, 59; тип 6, 11; тип 26, 51;
– инфекции, вызванные простейшими: Trichomonas vaginalis – трихомонады;
– грибковые инфекции: Candida albicans – кандида;
• ПЦР-диагностика бактериальных инфекций:
– бруцеллы: Brucella species вызывает заболевания дыхательных путей, мочевыделительной системы, органов половой сферы и опорно-двигательного аппарата;
– гемофилы: к настоящему времени известно 9 видов гемофил, вызывающих инфекции у человека. Haemophilus ducrei вызывает инфекции, передающиеся половым путем (симптомы – обильные водянистые, периодически гноевидные выделения с неприятным запахом из половых путей, дизурические явления). Haemophilus speciec вызывает заболевания дыхательных путей (симптомы – поражение дыхательных путей; кашель с мокротой; повышение температуры тела; слабость, недомогание);
– кампилобактерии: Сampulobacter species вызывает воспалительные заболевания половых органов у женщин и мужчин со следующими симптомами:
– дизурические явления (небольшие рези при мочеиспускании);
– слизисто-гнойные выделения из половых путей;
– тянущие боли внизу живота;
– листерии: Listeria monocytogenes вызывает заболевания отделов малого таза, мочевыводящих путей, суставов, органов дыхания со следующими симптомами:
– слизисто-гнойные выделения из половых путей;
– боли внизу живота;
– отек суставов, боли в суставах;
– кашель с мокротой;
– дизурические явления;
– микобактерии туберкулеза: развитие туберкулезной инфекции вызывают 4 вида микобактерий: Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium bovis; Mycobacterium africanum; Mycobacterium microti. Однако в патогенезе туберкулеза у человека ведущая роль принадлежит именно Mycobacterium tuberculosis. Во всем мире каждый год регистрируют около 8 миллионов новых случаев этого тяжелого заболевания, около 3 миллионов человек ежегодно умирает от туберкулеза;
– микоплазмы: внутриклеточные микробы, очень широко распространены в природе. Уреаплазмы – это особая и наиболее «популярная» разновидность патогенных для человека микоплазм. На их долю приходится большая часть хронических микоплазмозов человека. Кроме уреаплазм известно еще несколько видов безусловно патогенных для человека видов: Mycoplasma species, Mycoplasma pneumonia, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Urea-plasma parvum. Наиболее часто патогенными видами микоплазм поражаются:
– мочеполовые органы: пиелонефрит, уретрит, нарушение овуляции и сперматогенеза;
– сердечно-сосудистая система: артериальная гипотензия (гипотония), кардит, перикардит;
– органы пищеварения: невирусный гепатит, гастрит, холецистит, кишечные дисфункции (упорные диареи);
– респираторные органы: ОРЗ, хронический ринит, атипичная пневмония (не путать с азиатской «атипической пневмонией»!);
– суставы: ревматоидный артрит, подагра;
– центральная и периферическая нервная система: неврастении, невралгии, локальные болевые синдромы и, по некоторым данным, демиелинизирующие заболевания;
– кожа и слизистые оболочки: повышенная ломкость и проницаемость капилляров, вульгарные угри, простой герпес (микоплазмы принимают участие в транспорте вируса);
– нейссерии: для человека патогенными являются Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitides, также у человека выделяют непатогенные виды N. sicca, N. mucosa, N. perflava. Neisseria gonorrhoeae является возбудителем специфического венерического заболевания – гонореи;
– стрептококки: большинство стрептококков входят в состав нормальной микрофлоры дыхательных, мочевых, половых путей и ЖКТ, но некоторые их виды имеют важное значение как возбудители болезней человека:
– стрептококки группы A (Streptococcus pyogenes) вызывают ангину – одну из самых распространенных среди детей школьного возраста инфекций, а также широко известные постинфекционные заболевания – ревматизм и острый гломерулонефрит;
– стрептококки группы В (Streptococcus agalactiae) – основные возбудители сепсиса и менингита у новорожденных, послеродового сепсиса и эндометрита;
– трепонема: Treponema pallidum – возбудитель сифилиса;
– хеликобактер пилори: установлена четкая связь Helicobacter pylori с развитием гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, рака желудка и многих других заболеваний.
• ПЦР-диагностика вирусных гепатитов, герпеса и других вирусных инфекций:
– вирус Эпштейн-Барр (из семейства герпесвирусов) вызывает легкое заболевание у детей и инфекционный мононуклеоз у неиммунизированных подростков и взрослых, является вездесущей вирусной инфекцией и присутствует практически у 100 % популяции людей. Чаще всего заражение им происходит в раннем детском и в юношеском возрасте, поэтому более 90 % взрослых уже перенесли эту инфекцию в той или иной форме и имеют антитела к вирусу Эпштейн-Барр;
– герпес: самая распространенная вирусная инфекция. Около 90 % людей на земле инфицированы герпесом. Только у 5 % инфицированных проявляются симптомы болезни, у остальных она протекает без клинических проявлений. Наиболее часто вирус поражает: глаза (конъюнктивит, кератит), слизистую губ, слизистые оболочки половых органов, центральную нервную систему (энцефалит, менингит). У беременных женщин вирус может вызвать патологию беременности, самопроизвольные аборты, преждевременные роды;
– вирусные гепатиты – это гепатиты, вызванные вирусной инфекцией: А, В, С, G;
– цитомегаловирус: это целая группа вирусов, которые могут присутствовать в любой жидкости организма человека (кровь, моча, слюна, сперма, секрет влагалища, грудное молоко и т. д.). Цитомегаловирус во многом схож с вирусом простого герпеса, поэтому его относят к разновидности герпетических инфекций. Цитомегаловирус как болезнь может развиться в результате ослабления защитных реакций организма: на фоне сильных стрессов, гриппа, обострения хронических заболеваний, осложнений беременности;
– другие вирусные инфекции: ВИЧ, вирус Варицелла-Зостер, энтеровирус;
• ПЦР-диагностика острых кишечных и респираторных инфекций:
– респираторные инфекции: аденовирусы, грипп А и В, на РНК вируса гриппа A, A/ H1N1/CA/2009 (анализ на свиной грипп);
– вирусные кишечные инфекции: астровирус, норовирусы 1-го и 2-го типов, ротавирусы А и С, саповирус;
– бактериальные кишечные инфекции: Е. Coli (энтеротоксигенные штаммы), Shigella (геморрагические штаммы), Salmonella typhi, Salmonella species, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis.